胶原3D细胞培养试剂盒
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货号：TMcol3D-10/TMcol3D-100
规格：10 mL/瓶，100 mL/瓶 (5 mg/mL)
产品详情:
| 胶原原液 | |
| 来源 | 牛跟腱 |
| 形态 | 透明至乳白色液体 |
| 胶原浓度 | 5 mg/mL |
| 纯度 | ≥99%，通过SDS-PAGE检测 |
| pH | 2-4 |
| 内毒素 | < 0.5 EU/mL |
产品说明：
细胞外基质对细胞的发育和行为有极大的影响。Ⅰ型胶原作为细胞外基质的主要组成成分，常用于原代细胞培养。胶原蛋白可用于研究肿瘤细胞的侵袭和迁移、多能干细胞介导的肝细胞形成，神经细胞培养和移植，原代干细胞的体外培养及表型和功能的维持，体外类器官的三维培养，肿瘤球体（spheroids）形成及培养等多个生物学过程。赤萌胶原蛋白来源于国内顶级技术提取的活性牛Ⅰ型胶原，批间差异小，内毒素严格控制，无免疫原性，可用于各种细胞的体外三维培养及体内移植。
使用说明：
赤萌牛Ⅰ型胶原能在培养瓶/皿上作为薄层包被或凝胶化用于细胞附着。细胞可以培养在凝胶上或凝胶内。
在形成的胶原凝胶上进行细胞培养
1. 根据表1计算一定体积胶原基质所需各成分添加的量。
2. 准备碎冰置于冰盒中，接下来的混匀步骤需将混合管插入冰中。
3. 取50 mL无菌管，插入冰中，使用注射器移取适量体积的胶原原液到该无菌管中。
4. 接下来，加入对应体积的5×DMEM培养基和中和液，用注射器反复抽吸至少20次，至混合物变成红色。抽吸过程中应确保无菌管插在冰中。
5. 抽吸结束后，会看到混合物中有很多气泡。将无菌管放入离心机，3000 rpm，快速离心15 s后取出，插入冰上。
6. 将混合液加入需包被的细胞培养器皿，37℃孵育1 h即可在细胞培养器皿底部形成胶原凝胶。胶原凝胶应现用现配。
7. 将需要培养的细胞重悬在培养基中（该培养基应符合细胞的需求，加入如谷氨酰胺，抗生素，血清，生长因子等），加入胶原凝胶之上，正常培养。
在形成的胶原凝胶内进行细胞培养（即需要混合细胞和胶原凝胶共同培养）
1. 将预培养的细胞收集到离心管中，使用1×DMEM培养基进行重悬，其体积不应超过预使用的胶原凝胶体积的1/10。
2. 根据表1计算一定体积胶原凝胶所需各成分添加的量。
3. 准备碎冰置于冰盒中，接下来的混匀步骤需将混合管插入冰中。
4. 取50 mL无菌管，插入冰中，使用注射器移取适量体积的胶原原液到该无菌管中。
5. 接下来，加入对应体积的5×DMEM培养基和中和液，用注射器反复抽吸至少20次，至混合物变成红色。抽吸过程中应确保无菌管插入冰中。
6. 抽吸结束后，会看到混合物中有很多气泡。将无菌管放入离心机，3000 rpm，快速离心15 s后取出，插入冰上，5 min内需完成与细胞混合加入培养皿中。
7. 将细胞混入胶原混合物当中，用移液枪缓慢抽吸进行混合。
8. 加入细胞培养器皿，37℃孵育1 h即可在细胞培养器皿底部形成胶原凝胶。
9. 加入额外的细胞培养基（该培养基应符合细胞的需求，加入如谷氨酰胺，抗生素，血清，生长因子等）到胶原凝胶之上，正常培养。
表1制备胶原凝胶时试剂盒各成分添加量
| 总体积（mL） | 胶原（mL） | 5×DMEM（mL） | 中和液（uL） |
| 1 | 0.8 | 0.2 | 适量 |
| 5 | 4 | 1 | 适量 |
| 10 | 8 | 2 | 适量 |
注：建议凝胶中胶原的终浓度为4 mg/mL，上表以胶原终浓度为4 mg/mL计算。可根据具体实验所需要的凝胶强度调整胶原的终浓度。
注意事项：
1. 胶原原液不能冷冻，冷冻后再解冻会产生蛋白变性及蛋白沉淀。
2. 高浓度的胶原原液是粘稠状的，使用时应该一直放置在冰上。
3. 混合物在红色至粉红色之间，说明其为生理pH，可形成凝胶。
4. 当胶原原液出现浑浊不透明时，可能存在污染。
成功案例：成肌细胞
