胶原3D细胞培养试剂盒

产品详情:

 

胶原原液
来源 牛跟腱
形态 透明至乳白色液体
胶原浓度 5 mg/ml
纯度 ≥99%,通过SDS-PAGE检测
pH 2-4
内毒素 < 0.5 EU/mL

 

 

产品说明:

细胞外基质对细胞的发育和行为有极大的影响。Ⅰ型胶原作为细胞外基质的主要组成成分,常用于原代细胞培养。胶原蛋白可用于研究肿瘤细胞的侵袭和迁移、多能干细胞介导的肝细胞形成,神经细胞培养和移植,原代干细胞的体外培养及表型和功能的维持,体外类器官的三维培养,肿瘤球体(spheroids)形成及培养等多个生物学过程。赤萌胶原蛋白来源于国内顶级技术提取的活性牛Ⅰ型胶原,批间差异小,内毒素严格控制,无免疫原性,可用于各种细胞的体外三维培养及体内移植。

 

使用说明:

赤萌牛Ⅰ型胶原能在培养瓶/皿上作为薄层包被或凝胶化用于细胞附着。细胞可以培养在凝胶上或凝胶内。

 

在形成的胶原凝胶上进行细胞培养

1.  根据表1计算一定体积胶原基质所需各成分添加的量。

2.  准备碎冰置于冰盒中,接下来的混匀步骤需将混合管插入冰中。

3.  取50 mL无菌管,插入冰中,使用注射器移取适量体积的胶原原液到该无菌管中。

4.  接下来,加入对应体积的5×DMEM培养基和中和液,用注射器反复抽吸至少20次,至混合物变成红色。抽吸过程中应确保无菌管插在冰中。

5.  抽吸结束后,会看到混合物中有很多气泡。将无菌管放入离心机,3000 rpm,快速离心15 s后取出,插入冰上。

6.  将混合液加入需包被的细胞培养器皿,37℃孵育1 h即可在细胞培养器皿底部形成胶原凝胶。胶原凝胶应现用现配。

7.  将需要培养的细胞重悬在培养基中(该培养基应符合细胞的需求,加入如谷氨酰胺,抗生素,血清,生长因子等),加入胶原凝胶之上,正常培养。

 

在形成的胶原凝胶内进行细胞培养(即需要混合细胞和胶原凝胶共同培养)

1.  将预培养的细胞收集到离心管中,使用1×DMEM培养基进行重悬,其体积不应超过预使用的胶原凝胶体积的1/10。

2.  根据表1计算一定体积胶原凝胶所需各成分添加的量。

3.  准备碎冰置于冰盒中,接下来的混匀步骤需将混合管插入冰中。

4.  取50 mL无菌管,插入冰中,使用注射器移取适量体积的胶原原液到该无菌管中。

5.  接下来,加入对应体积的5×DMEM培养基和中和液,用注射器反复抽吸至少20次,至混合物变成红色。抽吸过程中应确保无菌管插入冰中。

6.  抽吸结束后,会看到混合物中有很多气泡。将无菌管放入离心机,3000 rpm,快速离心15 s后取出,插入冰上,5 min内需完成与细胞混合加入培养皿中。

7.  将细胞混入胶原混合物当中,用移液枪缓慢抽吸进行混合。

8.  加入细胞培养器皿,37℃孵育1 h即可在细胞培养器皿底部形成胶原凝胶。

9.  加入额外的细胞培养基(该培养基应符合细胞的需求,加入如谷氨酰胺,抗生素,血清,生长因子等)到胶原凝胶之上,正常培养。

 

表1制备胶原凝胶时试剂盒各成分添加量

总体积(mL) 胶原(mL) 5×DMEM(mL) 中和液(uL)
1 0.8 0.2 适量
5 4 1 适量
10 8 2 适量

注:建议凝胶中胶原的终浓度为4 mg/mL,上表以胶原终浓度为4 mg/mL计算。可根据具体实验所需要的凝胶强度调整胶原的终浓度。

 

注意事项:

1.  胶原原液不能冷冻,冷冻后再解冻会产生蛋白变性及蛋白沉淀。

2.  高浓度的胶原原液是粘稠状的,使用时应该一直放置在冰上。

3.  混合物在红色至粉红色之间,说明其为生理pH,可形成凝胶。

4.  当胶原原液出现浑浊不透明时,可能存在污染。

 

 

成功案例:成肌细胞

 

 

点击下载相关资料:附件文档1-胶原3D细胞培养试剂盒说明书

 

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