胶原蛋白包被促进间质干细胞的附着、存活和增殖

 

胶原蛋白包被促进间质干细胞的附着、存活和增殖

间质干细胞可分化成不同的细胞类型，包括骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、神经元、心肌细胞和内皮细胞，这使它们成为再生疗法的良好选择。在治疗应用中，获得足够数量的细胞来启动细胞治疗是一个限制性因素。为获得足够的细胞数量在体外长期培养细胞，可能会改变这些细胞的基因调控和分化潜力。同时长期的体外细胞培养会导致体内注射间充质干细胞后的间充质干细胞的死亡。因此，这意味着必须注射大量的间充质干细胞才能在体内获得理想的效果。这就需要一个更好的细胞扩增系统，促进细胞的高增殖、细胞存活和分化。细胞所处微环境的一些线索可以指导间充质干细胞保持干细胞样状态、并促进细胞增殖。本文介绍一种在胶原蛋白包被表面大量扩增保持干性的间充质干细胞的方法。

方法：

1.采用原代细胞培养试剂盒（赤萌医疗），按照产品说明书稀释胶原蛋白，

2.将稀释液加入组织培养板，37℃下孵育1h。

3.去除稀释液，用PBS清洗一次，组织培养平板可立即使用，或可在4°C储存24-48h内使用。

 

增殖和细胞存活。在没有涂层（CON）或涂有胶原蛋白（COL）、纤连蛋白（FBN）或聚赖氨酸（PLL）包被的培养板上培养间充质干细胞48-72小时。(A) 倍增时间是通过对生长在不同基质上的间充质干细胞的细胞计数来计算。(B) 通过MTT实验分析不同基质上的细胞增殖。*p<0.05表示与CON、FBN和PLL表面相比，生长在COL上的细胞增殖明显较高。(C) 通过胰蛋白酶法收集在COL、FBN和PLL以及TC表面（CON）上培养的间充质干细胞，用碘化丙啶染色，用流式细胞仪分析细胞周期曲线。数值是平均值±SD，n = 5-7个样本。(D) 在TC（CON）、COL、FBN和PLL表面播种等量的间充质干细胞，2小时或12小时后去除非粘附细胞，并计算粘附细胞。每个样品有五个不同的高倍视野进行显微镜下的计数。数值为平均值±SD，n = 3个样本（E）在低血清条件下（0.1%FBS），用H2 O2（400μm）处理MSC 2-3小时，通过计算每个条件下的活细胞和死细胞，分析细胞死亡的百分比。*p<0.05代表与其他条件相比，生长在COL上的细胞死亡明显降低。(F, G）生长在不同基质上的间充质干细胞被血清饥饿48小时，并在细胞中加入mitosox超氧化物指标30分钟，用流式细胞仪分析mitosox红色荧光，并确定阳性细胞的百分比。

 

参考文献：

PLoS ONE 10(12): e0145068.